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ABW基质胶在类器官(PDO)培养实验中的应用

发布时间: 2022-06-07  点击次数: 147次
   ABW基质胶是从富含胞外基质蛋白的小鼠肿瘤细胞中提取出基底膜基质,其主要成分有层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白,还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。在室温条件下,Matrigengel聚合形成具有生物学活性的三维基质,模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能,有利于体外细胞的培养和分化,可用于对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达等的研究。
  
  类器官是一个在Matrigengel的支撑下形成三维“微器官模型”,可以模拟天然器官的结构和功能。与传统的二维培养模型相比,类器官可以模拟出整个生物体的生理过程,具有更接近体内细胞组成和行为,基因组更稳定,更适合生物转染和高通量筛选的优点。与动物模型相比,类器官模型的操作不仅更简单,而且快速成型,两到三周即可得到所需数据。
  一、实验材料:
  细胞:病人肿瘤细胞
  培养基:F12K/DMEM培养基,PDO培养基
  耗材:预冷枪头、预热24孔板、预冷0.5ml离心管
  其它:Matrigengel(ABW货号0827035)
  
  二、实验步骤:
  A.实验准备
  1.提前24h将Matrigengel放置于4°冰箱慢慢融化,(为避免反复冻融,收到货以后分装成小规格保存,于-20°保存)
  2.需要提前制冰。
  B.细胞获取:从医院将病人的肿瘤组织,快速按照获取原代细胞的方法操作,获得肿瘤细胞。
  C.细胞种板:
  1.按每孔5000个细胞稀释,将细胞悬液放置在冰上,按照比例加入Matrigengel,混合均匀,将混合液滴入10ul-20ul到24孔板底部,每孔约3-4滴。
  2.将培养板放入37°培养箱中,孵育30min,待Matrigengel凝固。
  3.准备所需量PDO培养基,放入37°水浴锅预热。
  4.胶滴凝固以后,每孔加入500ul培养基。
  5.将培养板放会培养箱中继续培养。
  6.每隔两天采集图像记录。

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