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082703基质胶的操作方法

发布时间: 2022-10-19  点击次数: 53次
   082703基质胶是从小鼠肿瘤组织提取的基底膜成分(基底膜是动物体内上皮细胞基底面的一层基质膜),所形成的基质胶。主要成分为层粘连蛋白,Ⅳ型胶原蛋白,巢蛋白。同时,基质胶也包含多种生长因子,例如表皮生长因子EFG,血小板衍生生长因子PDGF,神经生长因子NGF等等。
  
  操作方法:
  一、类器官培养(操作所需时间为1小时)
  1、将基质胶于4°C冰箱里的冰上过夜解冻。
  2、将24孔板放置于培养箱预热。
  3、用预冷的枪头将解冻的基质胶进行分装。
  4、准备病人或者动物组织(或者类器官)来源的,细胞总数为1X105的单细胞悬液。300g离心5min。
  5、取50µL的OrganoGel基质胶与离心所得的细胞进行混匀。
  6、取出预热的24孔板,立即将基质胶与细胞的混合物滴加在孔板里,立即将24孔板放入培养箱。
  7、约10min后,基质胶凝固后,向孔板里加入500µL类器官培养基,放于培养箱进行培养。
  
  二、肿瘤类器官药敏实验(操作所需时间为2小时)
  1、将扩增好足够量的肿瘤类器官(实验组)以及正常类器官(对照组)用4°C预冷的基础培养基进行重悬,缓慢机械吹打,促进胶液化溶解,并保持类器官结构完整(可用于悬浮培养于有5%基质胶溶液的基质胶表面)(Guillenetal.2022)。或者通过TryplE酶消化获得单细胞悬液。
  2、离心收集类器官细胞,并进行细胞计数。
  3、加入OrganoGel基质胶原液,与细胞进行混匀。
  4、将细胞与胶的混合物,通过排枪加入37°C预热过的96孔板,或者384孔板,立即将孔板放入培养箱。
  5、大约10min后,OrganoGel基质胶将凝固,加入相应体积的类器官培养液进行培养。
  6、类器官形成后(如果是机械吹打,类器官将在传代24h后就会形成;如果是酶消化,类器官会在3-5天后形成),每个孔分别加入含有PI染料以及不同种类、不同浓度的待筛选的抗肿瘤药物。
  7、用高内涵显微镜上进行活细胞成像,测定肿瘤类器官对各种药物的敏感性。

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