【每周质检】小鼠胆管类器官培养效果测评

（1）试剂：MatrigengeL Matrix、小鼠胆管类器官培养试剂盒、类器官消化液、润洗液、基础培养基。

（2）耗材：48孔细胞培养板、离心管（规格为1.5mL）、移液器（规格为10μL、200μL、1000μL和5000μL）、无菌吸头（规格为10μL、200μL和1000μL）、40μm细胞过滤器。

（1）MatrigengeL Matrix 4℃化冻

（2）小鼠胆管类器官培养基的制备：将200μL Mouse Liver Ductal Organoid Supplement B (50x)，40μL Mouse Liver Ductal Organoid Supplement C(250x)加至9.76mL Mouse Liver Ductal Organoid Basal Medium中，充分混合，配制成10mL小鼠胆管类器官培养基，室温平衡，可在2-8°C储存，建议在两周内使用。

以下操作吹打细胞的吸头均需用润洗液润洗后使用：

（1）小鼠胆管类器官收集：保留原有培养液，用移液管吸头轻轻刮下吹打细胞外基质和小鼠胆管类器官混合物，转移至1.5mL离心管中，吹打5~10次，使小鼠胆管类器官和细胞外基质分离，300g离心3分钟。

（2）小鼠胆管类器官消化：离心后，去除上清液，分别加入200μL类器官消化液，吹打混匀后置于37℃培养箱中消化。

（3）小鼠胆管类器官终止消化：类器官消化时间5分钟，吹打混匀，加入1mL基础培养基吹打混匀以终止消化反应，300g离心3分钟。

（4）细胞过滤：加入1mL基础培养基重悬细胞沉淀，用40μm细胞筛网过滤细胞悬液，收集滤液至新的离心管中，300g离心3分钟。

（5）小鼠胆管类器官清洗：离心后用基础培养基清洗1次收集至同一个离心管中，离心以去除残留的消化液。

（6）细胞计数：用1mL基础培养基重悬细胞，取18μL细胞悬液与2μL台盼蓝混匀，取10μL混合液加至血球计数板中，显微镜下观察计数,300g离心3分钟，弃上清。

（7）基质胶3D包裹：根据密度加入适量基础培养基重悬细胞，取5 μL细胞悬液至新的离心管中，每组分别与18μL不同的细胞外基质冰上混匀（注意，混匀吹打的动作要轻柔，切忌产生大量气泡，常温混匀则需要控制在15秒内），混匀后置于冰上。

（8）种板培养：用移液器吸取10μL细胞外基质和细胞的混合液移至培养板孔中，混合悬液须点在培养孔底部中央位置，其铺开后不可接触培养孔侧壁，平行2孔。将培养板放入37℃，在5%二氧化碳细胞培养箱中孵育20分钟，待细胞外基质凝固至不再流动后，沿孔壁缓缓加入250μL培养基。

（9）持续培养：将细胞培养板放入培养箱中进行培养，每1天于倒置显微镜下观察小鼠胆管类器官的生长状态，于倒置显微镜下拍照，记录多个视野中类器官的形态和分布。

模基基质胶与Brand C基质胶均有良好的培养效果，两组实验胆管类器官均无明显贴壁现象，其中20224105CWD的培养效果会好一些。

模基生物基质胶经过严格的质检验证，具备安全性高、浓度多样性、批次稳定性好、低内毒素、无污染。在购买模基产品时，根据用户个性化的需求对用户进行最佳产品、货号的推荐。

1.Cholangiocyte organoids can repair bile ducts after transplantation in the human liver（science）